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    凝血檢測的誤差來源

    發表時間:2019-11-12

    存在凝血紊亂的病人可能出血或可能栓塞。凝血涉及凝血因子和血小板的激活。評估血小板事件, 可通過包括CBC計數,外周血涂片的檢查,出血時間的檢查和血小板聚集測試。評估凝血因子 典型地靠PT和APTT來看,異常的PT或aPTT可通過使用糾正實驗來確定由于因子缺乏還是抑制 物引起的。如果延長的時間在糾正實驗中得到糾正,則進行因子檢測識別哪個因子缺乏。抑制物 則包括某些特定因子的抑制物和狼瘡抗凝物,所以未得到糾正的應篩查一下。一般凝血檢查均采 用枸椽酸鈉抗凝管。本節講述各種影響凝血檢測結果的干擾因素。

     

     

    1. PT和APTT檢測的誤差 

    一般因子僅是輕微減少,不會影響導致凝血時間延長,只有比正常范圍減少20%-40%時,才可 能導致凝血時間延長。光學法的PT和APTT可能受高脂血,黃疸血影響而時間縮短。未適當離心 的血漿可能存在PF4,當使用APTT監測肝素時,PF4可與肝素結合,導致假性APTT縮短。同時 FVIII是急性時相反應蛋白,如果病人在急性炎癥期,可能FVIII急劇升高,導致APTT假性縮短。

     

    2. 凝血酶時間TT檢測的誤差 

    凝血酶時間即測量纖維蛋白原轉化形成(交聯)纖維蛋白的時間。纖維蛋白血癥,FDP 水平升高,和異常蛋白可干擾纖維蛋白的交聯從而導致假性TT延長。淀粉樣變性可抑制 纖維蛋白原轉化成纖維蛋白,也可導致TT延長。在一些嚴重疾病,如存在肝素類抗凝物 可導致TT延長。

     

     

    下面會詳細介紹實驗室中凝血特定檢測的常見干擾因素。1. 抗凝比例不對 枸椽酸抗凝管血液與抗凝劑比例為9:1的比例。充盈不足或過度可導致凝血時間檢測的 異常。

    HCT大于 55% 或小于21%時候,需要用以下公式修正: C= 0.00185 X(100 H)X VC 是3.2%枸椽酸鈉的量,以mL計,H 是HCT的值V 是血量,以mL計

     

    2. 稀釋或抗凝劑的污染 

    從留置管或導管中收集的血樣本可能存在檢測干擾。樣本被沖洗管路或溶血可影響凝血檢測 結果。如必須要從內置導管中收集血液,要避免從肝素化導管采集。 如果必須從肝素化的導管收集,采集前確保要足夠的沖洗。NCCLS 標準建議使用 5mL 生 理鹽水進行沖洗。收集前需至少使用 5mL 或 6 倍的導管的死腔量排出丟棄。血管護理標準 和實踐指南關于死腔量的使用推薦遵從制造商的說明書。此指南同時描述了血液不應從各種 不同類型的內置導管收集,靜脈注射裝置,和內置的心血管或臍帶中收集。即使新人死腔量 的的規定,樣本從肝素化的導管中采集容易被肝素污染。從而,最好從外周血中采集,避免 肝素,水蛭素,或阿加曲班注射治療用的手臂側采集。在凝血檢測前,肝素可被使用的聚凝 胺中和或去除;然而,殘留的肝素可能干擾到檢測。通過增強抗凝血酶活性,肝素抑制活化 的 FII,FX,FIX,FXI,FXII 和激肽 K。相比,重組水蛭素,達那肝素,和阿加曲班僅抑制 活化的 FII。這些抗凝劑(肝素,重組水蛭素,和阿加曲班)可導致 APTT 延長,并干擾凝 血檢測如因子檢測和狼瘡抗凝物檢測。因子檢測可產生假性減低,而狼瘡抗凝物可產生假陽性。

     

    3. 創傷性失血創傷性失血可導致人為的凝血檢測 PT 和 APTT 的縮短。

    這是因為內皮細胞釋放組織因子后 過度的激活凝血因子和血小板。正確的采集技術可避免此操作的組織因子混入從而避免此人 為的干擾。

     

    4. 類風濕因子

    RF纖溶過程是由纖溶酶介導,并降解纖維蛋白凝塊成為 D-二聚體和 FDP 的過程。纖溶同時也 降解完整的纖維蛋白原,產生 FDP。纖維蛋白降解產物和纖維蛋白原降解產物稱為 FDPs 或 FSPs.檢測 D-二聚體和 FDP 使用的是半定量或定量的免疫法。 乳膠凝集法:病人血漿與包被了抗-FDP 抗體的乳膠顆?;旌?。如果存在 FDP,則會與乳膠 顆粒中的 FDP 抗體結合。結合后聚集物可被觀察到。不同稀釋度的病人血漿可以被半定量 方法測量則為 FDP 滴度。乳膠凝集檢測同樣可用于 D-二聚體,不僅是技術員的肉眼觀察, 也可以凝血分析儀上測量濁度。ELISA 方法:定量的 ELISA 檢測可用于 FDP 和 D-二聚體。傳統 ELISA 檢測方法較精確, 但因為分析時間較長不常用?,F在也有自動化的 ELISA 檢測(VIDAS, bioMérieux, Durham, NC).D-dimer and FDP 檢測一個重要的干擾是 RF 的干擾??蓪е录訇栃越Y果。如果 PT, aPTT, TT, and fibrinogen 均正常,而 D-dimer and FDP 檢測升高很可能即出現此干擾。

     

    5. 脂血,溶血或血小板減少樣本的血小板聚集檢測

     血小板聚集測量血小板的相互粘附形成止血團塊的能力,是一期止血的關鍵成分??梢杂酶?血小板血漿或全血進行。膠原,瑞斯托霉素,花生四烯酸,二磷酸腺苷,腎上腺素,和凝血 酶可以刺激血小板因而誘導聚集。對激動劑的響應可提供對血小板功能紊亂的類型。測量聚 集的響應一般是基于樣本的透光性改變而測量 血小板聚集可受一些因素的影響。脂血和溶血標本可使聚集檢測困難,由于其使聚集的透光 改變減少。血小板減少也可使聚集評估很難,由于低血小板計數本身可產生異常聚集類型。

    6. 抗凝物或狼瘡抗凝物檢測的干擾

    ISTH 狼瘡抗凝物分支委員會推薦用兩個敏感的針對狼瘡抗凝物的檢測以評估不同凝血途徑 的成分。這是基于凝血時間的 dRVVT,和基于 APTT 的白陶土凝血檢測,和稀釋凝血酶原 時間(組織因子通路抑制測試)。狼瘡抗凝物可使磷脂依賴的凝血檢測的時間延長。因為其 結合磷脂因此干擾磷酯在凝血瀑布學說中的作用。狼瘡抗凝物篩查通過 使用一個低濃度的 磷脂以增強敏感性,任何異常篩查實驗結果(延長)一般需要 1:1 混合實驗以顯示凝血時 間依然延長。確認實驗一般是加入過量的磷脂,凝血時間則顯示縮短至正常趨勢。血小板中 和實驗(PNP)是一個確認檢測,冷凍-融解的血小板提供過量的磷脂。六邊相的磷脂中和 實驗也同樣基于相同的原理—即,凝血時間可能不被糾正,在磷脂的六相期時。需要關注的 是 APTT 可能會或不會延長,基于試用中磷脂的量多少。 在很多的抗凝物檢測中,肝素(包括皮下注射低劑量肝素)可以引起假陽性狼瘡抗凝物檢測 結果。肝素抑制活性 FII,X,IX,XI,XII 和激酶 K。因此,凝血時間如 PT 和 APTT 延長, 同時可被狼瘡抗凝物干擾。重組水蛭素,達那肝素,阿加曲班抑制活化的 II 因子和同時使 凝血時間延長。在凝血檢測開始前,可去除肝素或用聚凝胺中和;然而殘留的肝素可繼續造 成檢測的干擾。在香豆素類抗凝的樣本不影響狼瘡抗凝物檢測結果。

    以下是簡要總結,

     

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